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碘甘油微生物限度分析-一恒LRH-50F使用

返回列表 来源:未知 发布日期:2019-12-27 10:28【

1 仪器与材料 


1.1 仪器 


HFsafe - 1800TE Ⅱ型 B2 生物安全柜( 上海力申科 学仪器有限公司) ; LDZX - 80KCS 型压力蒸汽灭菌器, LDZX - 30KCS 型压力蒸汽灭菌器,均购自上海申安医 疗器械厂; BSD - TX345 型台式恒温振荡器( 上海博讯 实业有限公司) ; XY500JC 型电子天平( 常州市幸运电子 设备有限公司) ; HH - 系列电热恒温水浴锅( 北京科伟永 兴仪器有限公司) ; MJ 250FI 型霉菌培养箱,LRH - 250F 型生化培养箱,均购自上海一恒科学仪器有限公司; VORTEX - 5 型涡旋混合器( 海门市其林贝尔仪器制造 有限公司) ; Midi Plus 移液器( 德国赛多利斯公司) ; FC752 型薄膜过滤器( 杭州泰林生物技术设备有限公司) 。 


1.2 试药 


碘甘油( 规格为 1% ,每瓶 20 mL,批号为 170302, 某制药公司) ; 氯化钠( 天津市百世化工有限公司,批号 为 20150309) 。 


1.3 菌种 


铜 绿 假 单 胞 菌 Pseudomonas aeruginosa〔CMCC( B) 10104〕,金 黄 色 葡 萄 球 菌 Staphylococcus aureus 〔CMCC ( B) 26003〕,枯 草 芽 孢 杆 菌 Bacillus subtilis 〔CMCC( B) 63501〕,白 色 念 珠 菌 Candida albicans 〔CMCC( F) 98001〕,黑曲霉 Aspergillus nige〔r CMCC( F) 98003〕,大肠 埃希菌 Escherichia col〔i CMCC( B) 44102〕,均由中国食 品药品检定研究院提供,工作用菌株为第 3 代。


1.4 培养基及试剂 


胰酪大豆胨琼脂培养基( 批号为 1702042) ,胰酪大 豆胨液体培养基( 批号为 1703102) ,沙氏葡萄糖琼脂培 养基( 批号为 1704064) ,沙氏葡萄糖液体培养基( 批号 为 150914) ,pH 7. 0 氯 化 钠 蛋 白 胨 缓 冲 液 ( 批 号 为 1702242) ,蛋白胨培养基( 批号为 170208) ,麦康凯琼脂 培养基( 批号为 161213) ,甘露醇氯化钠琼脂培养基( 批 号为 160112) ,麦康凯液体培养基( 批号为 1612222) ,溴 化十六烷基三甲铵琼脂培养基( 批号为 170103) ,均由 北京三药科技开发公司提供,培养基适用性检查均符合 2015 年版《中国药典》要求。 


2 方法与结果 


2.1 菌液制备 


在生物安全柜中操作,将铜绿假单胞菌、金黄色葡 萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌置 50 mL 胰酪大豆 胨液体培养基中,于 30 ~ 35 ℃培养箱中培养 18 ~ 24 h; 将白色念珠菌接种至 50 mL 沙氏葡萄糖液体培养基中, 于 20 ~ 25℃ 培养箱中培养 2 ~ 3 d; 上述新鲜培养物用 无菌 0. 9% 氯化钠溶液稀释成适宜浓度的菌悬液,等待 接种。将黑曲霉接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基斜面上, 于 20 ~ 25 ℃培养箱中培养 7 d 或直至产生丰富的孢子, 加入少量含 0. 05% ( L / L) 聚山梨酯 80 的无菌 0. 9% 氯 化钠溶液,洗脱孢子,也可借助无菌长柄棉签轻轻擦 拭孢子,收集孢子悬液; 用含 0. 05% ( L / L) 聚山梨酯 80 的无菌 0. 9% 氯化钠溶液将黑曲霉稀释成适宜浓度 的孢子悬液,等待接种。 


2.2 供试液制备 


取供试品 10 mL,加入 pH 7. 0 氯化钠蛋白胨缓冲 液至 100 mL,45 ℃ 恒温振荡 15 min,制成 1 ∶ 10 的供试 液 A。取 1 ∶ 10 供试液 A 20 mL,加入 80 mL pH 7. 0 氯化 钠蛋白胨缓冲液,混匀,制成 1 ∶ 50 的供试液 B。 


2.3 微生物计数方法适用性试验 


1) 平皿法。试验组: 取 2. 2 项下供试液 A,B 分别置 5 个无菌试管中,每管装量 9. 9 mL,再分别加入 2. 1 项 下稀释好的含菌量为 103 ~ 104 cfu / mL 的铜绿假单胞 菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲 霉试验菌液 0. 1 mL; 供试品对照组: 取稀释好的供试液,以稀释液代替菌液,同试验组操作; 菌液对照组: 取 相应稀释液替代供试液,同试验组操作。


3 讨论 


碘甘油中的甘油在制剂中除了有助溶、矫味、增稠 多种作用外,还有抗菌防腐作用。碘除作治疗药和其他方 面的用途外,在碘甘油药剂中主要用作杀菌消毒剂和抑 菌防腐剂,所以碘甘油对铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球 菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉都有一定抑菌作 用。通过稀释法( 1 ∶ 50) 也不能完全消除对 5 种菌的 抑制,采用薄膜过滤法可高效地消除碘甘油的抑菌性。故 对于碘甘油的微生物限度检查,首先建立方法适用性试 验时应消除碘甘油中的抑菌作用,以免出现假阴性。消除制剂的抑菌性,一般的试验顺序是稀释法、含中和剂的 稀释法、薄膜过滤法、含中和剂的薄膜过滤法。




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