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分析大肠埃希菌的表型特征探讨

返回列表 来源:未知 发布日期:2019-08-28 10:01【

致泻性大 肠 埃 希 菌 包 括 产 志 贺 毒 素 大 肠 埃 希 菌 (STEC),侵 袭 性 大 肠 埃 希 菌(EIEC),产 肠 毒 素 大 肠 埃希菌(ETEC),肠致病性大肠埃希菌(EPEC)和肠聚 集性大肠埃 希 菌(EAEC)。其 中,STEC 能 导 致 血 性 腹泻、出血性肠 炎,甚 至 严 重 的 溶 血 性 尿 毒 症 综 合 征 (HUS),国 内 外 已 有 报 道。



1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 培养基


哥伦比亚血平板、麦康凯平板、山梨 醇麦康凯平板购自广州市迪景微生物科技有限公司, 大肠埃希菌 O157显色平板购自法国科玛嘉公司。诊 断血清:大肠埃希菌诊断血清购自丹麦国家血清研究 院。OK O Pool1 血 清 (内 含 O157 血 清 型)批 号: P1Q1-2H1,有效期2021-07-30;O157单价血清批号: O157K1-1H2,效 期 2020-01-03;H7 单 价 血 清 批 号:H7E1-H15,效期至2021-06-06,均在有效期内。



1.1.2 生化管

MUG 和山梨醇生 化 管 购 自 杭 州 滨 河微生物试剂有限公司,均在有效期内。



1.1.3 试验菌株

大 肠 埃 希 菌 O157:H7(ATCC 43888)、大肠 埃 希 菌 O157:H7(NCTC12900)、大 肠 埃希菌 O157:H7(卫生部室间质评菌株1708)3株标 准菌株 以 及 大 肠 埃 希 菌 ATCC25922、EIEC O143、 ETEC、EPECO111、EAEC 各1株,均为本室 收 藏 质 控菌株。



1.1.4 临床菌株

2018年4月至2019年2月广州 市花都区餐饮从业人员粪便(肛 拭 子)中 随 机 检 出 的 大肠埃希菌357株。



1.2 仪器与 试 剂

ATB 半 自 动 微 生 物 仪 及32E 鉴 定条和吲哚试剂、VITEK2-compact全自动微生物仪 及革兰阴性菌鉴定卡(GN 卡),法国生物梅里埃公司 生产,鉴定条、鉴定卡及试剂均在有效期内。基 质 辅 助激光解 吸-飞 行 时 间 质 谱 仪(VITEK MS),法 国 梅 里埃公司生 产。DHP-9052电热恒温培养箱,上 海 一 恒科学仪器有限公司生产。ZF-80型暗箱四用紫外线 分析仪,上海嘉鹏科技有限公司生产。



1.3 方法

通过实验菌株的菌落特征、MUG 和山梨 醇发酵试验结果以及自动化仪器鉴定、血清学试验鉴定大肠埃希菌 O157:H7,找出该菌的鉴定特征。用哥 伦比 亚 血 平 板 复 苏 大 肠 埃 希 菌 O157:H7、ATCC 25922、EIEC O143、ETEC、EPEC O111、EAEC 六 种 菌,同时 接 种 MUG 和山梨醇生化管,并 划 线 接 种 麦 康凯平板、山梨醇麦康凯平板、大肠埃希菌 O157显色 平板观察菌落特征,并做玻片法血清学凝集试验。健 康体检人员的粪便拭子划线接种山梨醇麦康凯平板, 35℃孵育18~24h,挑选无色透明(山梨醇阴性)、红 色(山梨醇阳性)菌落转种哥伦比亚血平板经35 ℃孵 育18~24h,取 革 兰 阴 性、氧化酶阴性的培养物,用 ATB进行生化鉴定,鉴定出的大肠埃希菌(选择好的 或者极好的 鉴 定 菌 株)接 种 MUG 和山梨醇生化管。 对 MUG 阴性或 山 梨 醇 阴 性 以 及2项试验均阴性的 大肠埃希菌划 线 接 种 麦 康 凯 平 板、大 肠 埃 希 菌 O157 显色平板,观察菌落特征并做玻片法血清凝集试验。



2 结  果

质控菌 株 的 MUG 和山梨醇以及血清学试验质 量控制合格,3株大肠埃希菌 O157:H7的 MUG 和山 梨醇均阴性、与 大 肠 埃 希 菌 O157多 价、O157单 价 及H7单 价 血 清 凝 集。其他的大肠埃希 菌结果明确。 MUG 和山梨醇试验及大肠埃希菌 O157:H7血 清 学 试验的质量 控 制 结 果 如 下。MUG(+)山 梨 醇(+): 大肠埃 希 菌 ATCC25922;MUG(-)山 梨 醇(-)为 O157:H7 ATCC 43888、O157:H7 NCTC 12900、 O157:H7卫生部质评菌1807;O157:H7血清学(+) 为 O157:H7ATCC43888、O157:H7NCTC12900、 O157:H7卫生部质评菌1807;O157:H7血清学(-) 为大肠埃希菌 ATCC25922。 三株大肠埃希菌 O157:H7的 MUG 和山梨醇试 验均阴性;EPECO111的 MUG 阳性,山梨醇阴性;其 他的菌株2项试验均阳性,见图2,图3;山 梨 醇 试 验结果与山梨醇麦康凯平板菌落特征吻合。



3 讨  论   

大 肠 埃 希 菌 O157:H7的 MUG 阴 性,山梨醇阴性,有两个血清型,85%为 O157:H7(有动 力), 12%为 O157:HNM(无 动 力),3% 是 H7 以 外 的 H 型。由于临床微生物室通常不将其作为目的菌,且此 菌在麦康凯平板上是红色菌落,可能作为非致病菌排 除。 来自粪便中的357株大肠埃希菌,未检出 O157: H7,可 能 与 健 康 人 群 带 菌 率 低 有 关。 虽 然,根 据 MUG 或山梨醇 单 一 试 验 可 以 筛 查 O157,但 有 较 高的假阳性,因 MUG 和山梨醇均阴性的大肠埃希菌 只有2.2%,故选择“双阴”菌株作进一步鉴定,特别在 大批量标本筛查时省时省力、且节省血清。



 


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