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浅谈抑制茶炭疽病病菌活的要素

返回列表 来源:未知 发布日期:2019-08-27 10:58【

茶炭疽病是我国茶园中常见的主要病害 之一,在高温高湿天气发病较重,在茶叶上可 形成大型斑块,并造成茶树大量落叶,该病可 使投产茶园秋茶减产 15%~30%,严重的达到 40%~50%,造成茶树产量与茶叶品质都下降。 茶树上登记防治茶炭疽病的杀菌剂有吡唑醚 菌酯、啶氧菌酯、多抗霉素和代森锌等, 施用化学农药是目前防治茶炭疽病的主要手 段。目前世界各茶叶进口国加强了茶叶农药最 大残留的限制,使得防治茶树病害的化学农药 不宜使用。随着我国化学农药减施增效战略实 施和茶叶产业的国际化、现代化、标准化的推 进,茶园减施,甚至不施化学农药也将成为必 然趋势。为了有效减少化学农药的使用,利用 植物体内的次生代谢物质对茶树病害进行防 控是有效的防治途径之一,其中利用芦柑皮、 艾蒿等提取物及山苍子等植物精油来抑制茶 炭疽病成为研究热点。



1 材料与方法

1.1 主要仪器及药剂


99%右旋香茅醇购于上海阿拉丁试剂有 限公司;97%左旋香茅醇[(-)-β-香茅醇]购于上 海萨恩化学技术有限公司;无水乙醇(天津市富宇精细化工有限公司),10%多抗霉素可湿 性粉剂购于山西奇星农药有限公司,吐温-80 (天津市大茂化学试剂厂)。超净工作台(苏 净集团安泰公司);电热鼓风干燥箱(上海一 恒科技有限公司);电子天平(型号: BSA224S-CW);恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂);高温蒸汽灭菌锅(上海沉汇仪器有限公司)。 供试菌株:茶炭疽病菌(C. gloeosporioides), 由贵州省茶叶研究所提供。



1.2 试验方法

1.2.1 香茅醇及其异构体对茶炭疽病的室内毒力


采用生长速率法。在药剂初筛的基础 上选出 5 个有效浓度梯度,配置成相应的 PDA 毒体培养基,用 5 mm 打孔器在活化好的茶炭 疽病培养皿沿菌丝边缘打孔,将菌饼放入到培 养皿中央,带菌丝面与 PDA 培养基面相接触, 以含 0.1%吐温-80 和 5%无水乙醇无菌水溶液 作对照,每个处理 4 次重复。茶炭疽病菌株由 贵州省茶叶研究所提供(已纯化);将密封保 存在试管内的菌株用接种针挑取少量菌丝转 移到 PDA 培养基中,置于 25℃恒温培养箱内 培养 120 h,活化菌株,即可开展下一步试验。 置于 25℃恒温培养箱内培养 120 h,采用十字 交叉法测得菌丝体生长直径,计算对炭疽病病 菌生长的抑制率,求出毒力回归方程及抑制中 浓度(EC50)。生长抑制率公式: 生长抑制率=(∆D1-∆D2)/∆D1×100% ∆D1 为对照菌落直径与菌饼直径的差值, ∆D2 为处理菌落直径与菌饼直径的差值。



1.2.2 香茅醇异构体不同组分增效配比筛选

根据 Horsfall 方法设计混配比例。以右 旋香茅醇和左旋香茅醇两种单剂的有效中浓 度 EC50 为基础,配制两种单剂化合物的有效 中浓度药液,按体积比(9︰1)、(8︰2)、(7︰ 3)、(6︰4)、(5︰5)、(4︰6)、(3︰7)、(2︰8)、(1 ︰9)进行混合,分别测定每组混合处理 120 h 后 对茶炭疽病菌菌丝生长抑制率。根据体积比测度 的抑制率选出较好的体积比,先配制单剂浓度梯 度,再按相对应的浓度梯度顺序将两单剂按具有 增效作用组合的体积比混配,得到增效配比混剂 的浓度梯度。计算出各单剂和混剂处理后 120 h 的毒力回归方程及抑制中浓度(EC50)。



1.2.3 数据统计方法

根据 Sun 等的方法求出共毒系数及增效倍数,共毒系数大于 120 表示具增效作用, 小于 80 表示拮抗作用,介于 80~120 之间表示 相加作用。以剂量对数值(x)为自变量,抑 制率(y)为因变量,采用 DPS 7.05 软件计算 毒力回归方程、抑制中浓度(EC50)、相关系 数。共毒系数的计算方法参照李建明等的方 法: 共毒系数(CTC)= 增效组合实际毒力指数 增效组合理论毒力指数。



2 结果与分析

采用菌丝生长速率法,测试了香茅醇及其 不同异构体(右旋、左旋香茅醇)和 10%多抗 霉素(对照药剂)对茶炭疽病菌的室内毒力。结果表明,经过处理后的 120 h,右旋香茅 醇和左旋香茅醇对茶炭疽病菌的菌丝生长抑制 中浓度 EC50 分别为 (113.27±0.95) mg·L-1 和 (119.87±0.20) mg·L-1 ,均低于香茅醇 [(144.12±0.42) mg·L-1],而高于对照药剂 10% 多抗霉素可湿性粉剂[(105.06±0.32) mg·L-1]。根据单剂毒力测定结果,对右旋香茅醇和 左旋香茅醇进行混配增效配比的定性筛选。结 果表明(表 2),处理后 120 h,右旋香茅醇 和左旋香茅醇的 EC50 体积配比为(6︰4)、(5 ︰5)、(4︰6)、(3︰7)和(2︰8)时,对菌丝生长 的校正毒力比均大于 1,表现为增效作用;配 比为 1︰9 时,校正毒力比明显小于 1,表现 出拮抗作用;其他配比的校正毒力比为 1 左右, 表现出相加作用。采用共毒系数法,对右旋 香茅醇和左旋香茅醇进行混配增效配比的定 量筛选。由表 3 可见,处理后 120 h,右旋香 茅醇和左旋香茅醇的五组质量比中,配比为 (1∶1.4)、(1︰3.8)、(1.6︰1)时,EC50 值分别 为(98.05±9.02) mg·L-1、(95.72±9.40) mg·L-1 和 (89.54±8.21) mg·L-1,共毒系数分别为 120.57、121.42 和 130.19,均大于 120,表现为增效作 用,分别增效 20.57%、21.42%和 30.19%;另 外两个配比的共毒系数均介于 111~120 之间, 表现为相加作用。通过两异构体不同质量配比 后能有效提升对茶炭疽病的毒力,EC50 值除 配比为 1∶1 配比外均低于对照药剂(10%多 抗霉素可湿性粉剂)。



3 讨论

香茅醇及其异构体(右旋香茅醇和左旋香 茅醇)对茶炭疽病(C. gloeosporioides)有着较 好的抑菌效果,EC50 值均在 150 mg·L-1 以下, 与 Nidiry 等的研究结果基本一致。香茅醇 属于单萜类化合物,Knobloch 等报道精油 成分在水中的溶解度直接关系到它们穿透细菌或真菌细胞壁的能力,决定抑菌活性的大小, 根据这个理论,在今后实际加工使用中,可将其 加工成水性化剂型,如微乳剂、水乳剂等,以提 高亲水性和抑菌活性。



 


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