冠心苏合制剂微生物限度检查(一恒GHP-9270使用)

冠心苏合丸和冠心苏合胶囊均由苏合香、冰片、醋 乳香、檀香和土木香制成，具有理气、宽胸、止痛的功 效，用于寒凝气滞、心脉不通所致的胸痹，症见胸闷、心 前区疼痛; 冠心病心绞痛见上述证候者。二者均为 口服给药制剂，按照 2015 年版《中国药典》四部非无 菌药品微生物限度标准规定，应对需氧菌总数、霉菌和 酵母菌总数、大肠埃希菌、耐胆盐革兰阴性菌和沙门菌 等 5 项微生物指标加以控制。由于其处方中冰片、 乳香和苏合香都有抗菌消炎的作用，故进行微生 物限度检查时，应消除样品的抑菌活性，建立一种可靠 有效的，适用于本品的方法。

1 仪器与试剂

1． 1 仪器

全自动微生物分析系统( Vitek 2 compact，生物梅 里埃) ; 生物安全柜( BHC － 1000ΙΙA/B3，苏净集团安 泰公司) ; 隔水式恒温培养箱( 一恒GHP-9270，上海一恒 科学仪器有限公司) ; 生化培养箱( LRH － 250，上海一 恒科学 仪 器 有 限 公 司) ; 高 压 灭 菌 锅 ( HVA － 110， HIRAYAMA) ; 微量移液枪( BRAND) 等。

1． 2 菌种

大肠埃希菌［CMCC( B) 44102］、金黄色葡萄球菌 ［CMCC ( B ) 26003 ］、枯 草 芽 孢 杆 菌 ［CMCC ( B ) 631001］、铜绿假单胞菌［CMCC( B) 10104］、乙型副伤 寒沙门菌［CMCC( B) 50094］、白色念珠菌［CMCC( F) 98001］和黑曲霉［CMCC( F) 98003］均来源于中国药品 生物制品检定所，以上菌种均为第 4 代培养物。

1． 3 培养基

胰酪大豆胨液体培养基( 批号: 160912) 、胰酪大 豆胨琼脂培养基( 批号: 170321) 、沙氏葡萄糖液体培 养基( 批号: 150914) 、沙氏葡萄糖琼脂培养基( 批号: 1705042) 、麦康凯液体培养基( 批号: 160801) 、麦康凯 琼脂培养基( 批号: 1608303) 、RV 沙门增菌液体培养 基( 批 号: 151012 ) 、肠道增菌液体培养基 ( 批 号: 1702162) 、紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基 ( 批 号: 1702142) 、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基( 批号: 171011) 和 pH 值 7． 0 无菌氯化钠 － 蛋白胨缓冲液( 批 号: 161130) 均来自于北京三药科技开发公司。

1． 4 样品

冠心苏合胶囊( 批号: 171004，河北万岁药业有限公司) ; 冠心苏合丸( 批号: 1706137，哈药集团世一堂 制药厂) 。

2 方法与结果

2． 1 菌液制备

按照2015 年版《中国药典》制备上述菌种的菌悬液。

2． 2 供试液制备

取样品 10 g，加胰酪大豆胨液体培养基 90 mL， 45 ℃水浴保温，用匀浆仪混匀，得 1 ∶ 10 供试液，再 10 倍梯度稀释得 1∶ 100 和 1∶ 1 000 供试液。

2． 3 计数方法适用性试验

2． 3． 1 试验组

平皿法: 取 1∶ 10、1∶ 100 和 1∶ 1 000 供试液 10 mL 至试管中，分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、 枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉，使每毫升供试液 含菌量不大于 100 cfu。取菌悬液 1 mL 至平皿，平行 制备 2 个平皿，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，培养计 数。再从接种白色念珠菌和黑曲霉的供试液试管中， 取悬液 1 mL 至平皿，平行制备 2 个平皿，倾注沙氏葡 萄糖琼脂培养基，培养计数。 薄膜过滤法: 取供试液 1 mL，按薄膜过滤法过滤， 用 0． 1% 蛋白胨水溶液冲洗 3 次，每次 100 mL。在最 后一次冲洗液中分别加入小于 100 cfu /mL 的 5 种菌 悬液，过滤。将过滤后的滤膜贴于琼脂培养基平板表 面，培养计数。

2． 3． 2 供试品组

除不加试验菌外，其他同试验组。

2． 3． 3 菌液组

分别取上述 5 种试验菌悬液 1 mL 至平皿中，平行 制备 2 个平皿，倾注相应的琼脂培养基，培养计数。

2． 3． 4 回收率计算

冠心苏合胶囊计数方法适用性试验回收率见 表 1，冠心苏合丸计数方法适用性试验回收率。 回收率( % ) = ( 试验组菌落数 － 供试品组菌落 数) /菌液组菌落数 × 100%

2． 4 控制菌检查方法适用性试验

试 验 组: 取 1 ∶ 10 供 试 液 10 mL 及 不 超 过 100 cfu /mL的大肠埃希菌悬液 1 mL 加入到 100 mL 的 胰酪大豆胨液体培养基中，33 ℃培养24 h。吸取1 mL 培养物接种至 100 mL 麦康凯液体培养基中，43 ℃ 培 养 24 h。取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂 培养基平板上，33 ℃ 培养 24 h，观察是否有菌生长。 挑取单菌落分离纯化，经革兰染色后用 Vitek 2 compact 进行生化鉴定。

3 讨论

冠心苏合胶囊和冠心苏合丸对细菌具有一定的抑 制作用，由于二者的处方一致，其抑菌作用没有显 著差异。在需氧菌计数方法试验中，二者 1∶ 10 供试液 对革兰阴性菌如铜绿假单胞菌基本没有抑制作用，但 对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌抑制作用较强。当 供试液稀释至 1∶ 100 和 1∶ 1 000 时，仍对枯草芽孢杆 菌有较强的抑制作用。使用薄膜过滤法处理时，1∶ 10 供试液黏稠度较高，药渣较多，难以通过滤膜，而1∶ 100 供试液仍有较多的药渣残留在薄膜上，枯草芽孢杆菌 的回收率仍不能达到 50% ，最后选用 1∶ 1 000 供试液 采用薄膜过滤法才能消除样品的抑菌活性，5 种菌的 回收率均超过 50% 。而在霉菌和酵母菌总数计数以 及控制菌检查试验中，常规法既可达到要求。



 

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