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银杏外种皮中银杏酸的工艺研究-一恒干燥箱的使

返回列表 来源:未知 发布日期:2019-10-10 11:11【

银杏 Ginkgo biloba L. 为银杏科银杏属多年落叶乔木。银杏酸是分布于银杏叶、果和外种皮中的 生物活性物质,在外种皮中含量最高。其为一系 列弱极性化合物,包括白果新酸、白果酸、十七烷二 烯银杏酸、氢化白果酸以及十七烷一烯银杏酸 5 种 主要成分,其中白果酸含量最高,也是目前对银 杏烃基酚酸类化合物进行定量检测的主要指标。 银杏酸对多种肿瘤细胞有较强的抑制作用,可抑制 肿瘤 细 胞 增 殖、侵 袭、迁移及诱导肿瘤细 胞凋亡,有较好的研究价值及市场应用前景。银杏 外种皮是银杏果实的最外层肉质皮,常被作为废弃物,以其为原料提取银杏酸,有助于资源的充分利 用。然而,在外种皮开发利用及工艺研究过程中,还 存在问题: 银杏外种皮的开发利用工作还处在实验 室的探索研究阶段,未进行工厂化大规模生产,落后 于银杏叶的开发利用。

1 材料与方法

1. 1 仪器与试剂

1. 1. 1 仪器

FA2204B 型电子天平( 上海精科天美科学仪器有限公司) ,LC-20A 型高效液相色谱仪 [岛津企业管理( 中国) 有限公司],IKA 旋转蒸发仪 ( 上海人和科学仪器有限公司) ,XW-80A 型微型旋 涡混合仪( 上海沪西分析仪器厂有限公司) ,L550 型离心机( 湖南湘仪实验室仪器开发有限公司) ,MilliQ Advantage A10 型超纯水系统( 密理博( 中国) 有 限公司) ,GR150A 型粉碎机( 合肥荣事达小家电有 限公司) ,DHG-9420A电热恒温鼓风干燥箱( 上海一恒科学仪器有限公司) 。

1. 1. 2 试剂

银杏外种皮( 购买于山东临沂药材 市场,经蚌埠医学院中医药基础教研室李红梅老师 鉴定为银杏科银杏属植物银杏的外种皮) ,碳酸氢 钠( 分析纯,天津市大茂化学试剂厂) ,盐酸( 分析 纯,江苏彤晟化学试剂有限公司) ,白果酸标准品 ( 上海源叶生物科技有限公司,纯度 > 95% ) ,甲醇、 乙腈( 色谱纯,美国天地有限公司) ,三氟乙酸( 分析 纯,天津市大茂化学试剂厂) 。 1. 2 溶液配制 1. 2. 1 供试品溶液的制备 取银杏外种皮粉末适 量,加碳酸氢钠水溶液碱提,过滤取滤液,用盐酸调 pH,酸沉,过滤取滤渣,干燥即得。

1. 2. 2 对照品溶液的制备

取白果酸标准品,精密 称定 5. 0 mg,色谱甲醇溶解配成 9. 6 mg /mL 的白果 酸对照品储备液,用色谱甲醇依次稀释 2 倍,得到系 列浓 度 工 作 液,依 次 为 4. 8、2. 4、1. 2、0. 6、0. 3、 0. 15 mg /mL。

1. 3 色 谱 条 件

色 谱 柱: Waters Sun FireTM C18 ( 4. 6 mm × 150 mm,5 μm) ; 检测器: 岛津 SPD-20a ; 波长 310 nm; 柱温 30 ℃ ; 流速 1 mL /min; 进样量 20 μL; 流动相为 0. 05% 三氟乙酸水溶液( A) - 乙 腈( B) ,梯度洗脱( 0 ~ 30 min,75% B→90% B; 30 ~ 35 min,90% B; 35 ~ 45 min,90% B→75% B) 。

1. 4 方法学考察

1. 4. 1 标准曲线绘制

分别取“1. 2. 2”项下不同 浓度的对照品工作液,按照“1. 3 色谱条件”进样分 析,记录峰面积。

1. 4. 2 专属性

分别取对照品溶液和供试品溶液 20 μL,按照“1. 3 色谱条件”进行分析。

1. 4. 3 加样回收率试验

精密称取已知含量的银 杏外种皮粉末 0. 1 g 6 份,分别加入精密称定的白果 酸对照品,按照“1. 2. 1”项下方法处理,按“1. 3 色谱 条件”测定 6 份混合后的峰面积,计算回收率。

1. 4. 4 日内精密度

取同一银杏外种皮提取液,按 照“1. 3 色谱条件”连续进样 6 次分析,测峰面积并计算相对标准偏差( RSD) 。

1. 4. 5 日间精密度

取同一份银杏外种皮提取液 按照“1. 3 色谱条件”连续 3 d,每天连续进样 3 次, 测峰面积并计算 RSD。 1. 4. 6 重复性试验 按照“1. 2. 1”项下方法制备 同一浓度银杏外种皮提取液 6 份,“1. 3 色谱条件” 进样分析,测峰面积并计算 RSD。 1. 4. 7 稳定性试验 取同一银杏外种皮提取液,分 别于 0、12、24、48、96、120 h 按照“1. 3 色谱条件”进 样分析,测峰面积并计算 RSD。

2 结果

以峰面积为纵坐标( Y) ,浓 度为横坐标( X) ,得线性回归方程为 Y = 5E + 6X + 685 953,r = 0. 999 4 ( n = 6) ,结果表明银杏酸在 0. 15 ~ 4. 8 mg /mL 浓度范围内具有良好线性关系。 2. 1. 2 专属性 待测组分峰形良好,白果酸对照品 保留时间为 26. 8 min,分离度 > 2,与其他峰可达到 基线分离( 见图 1) 。

单因素试验结果表明,随着料液 比增加,白果酸含量先增加后减少,1∶ 10 料液比下银杏外种皮中银杏酸含量较高。随着碱液浓度增 大,银杏酸含量变化幅度平缓,考虑到生产成本,碱 液浓度选择为 3% 。随着碱提时间增加,白果酸含 量逐渐增加并达到平缓趋势,因此最佳碱提时间选 择为 1 h。不同酸沉 pH 对应的白果酸含量相差无 几,为节约盐酸用量,选择酸沉 pH 为 5 作为最佳酸 沉 pH。随着酸沉时间延长,对应的白果酸含量增加 趋势较小并保持平缓,因此最佳酸沉时间选择为 1 h。

3 讨论

中国是银杏之乡,为了充分利用资源优势,人们 对银杏资源研究逐渐深入,近年来研究表明,银杏外 种皮中的有效部位银杏酸在抗菌、抗炎、杀虫等 方面具有很好的活性,也可抑制多种肿瘤的生长,已应用于医学研究、生物农药和化妆品等 方面。银杏外种皮中含有丰富的银杏酸,从中提取 银杏酸,可充分利用资源优势,变废为宝,具有广阔 的应用前景。利用银杏酸具有的酸性化学性质,以银杏外种皮为原料,采用碱提酸沉法提取银 杏酸,通过正交试验确定最佳提取条件。