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上海一恒分析葛仙米多糖提取工艺

返回列表 来源:未知 发布日期:2019-09-06 09:46【

葛仙米(Nostoc sphaeroides Kützing)是蓝藻门念珠 藻科的一种低等单细胞蓝藻,古名天仙菜、天仙米,俗 称水木耳。据《纲目拾遗》记载,葛仙米“性寒,味甘 爽”,具有“解热,清膈,利肠胃”的功效。现代关于葛 仙米的研究包括基础物质、药理活性以及提取工 艺。通过对这些研究报道分析,葛仙米多糖以其含量最高、活性最强及研究报道最为详尽为葛仙米中最 重要的成分。而对葛仙米多糖的研究,提取为初始步 骤,尤为重要。目前关于葛仙米多糖的提取研究,主要 包括单因素、正交等,而尚未发现响应面法提取葛仙 米中多糖的工艺研究。



1 材料与仪器

葛仙米:湖南炎帝生物科技有限公司;葡萄糖醛 酸、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖:中国食品 药品检定研究院。 三氟乙酸(trifluoroacetic acid,TFA)、1-苯基-3-甲 基-5-吡唑啉酮 (3-methyl-1-phenyl-2-pyrazolin-5- one,PMP)、95 %乙醇(分析纯):国药集团化学试剂有 限公司。 水浴锅(HWS24):上海一恒科学仪器有限公司; 离心机(ST16R):赛默飞世尔科技公司;旋转蒸发仪 (RE-2000B):上海亚荣生化仪器厂;高效液相色谱仪 (Uitimate 3000):赛默飞世尔科技公司;电子天平(XSE 205DV):梅特勒-托利多国际贸易有限公司;超声仪 (HNS-SY-150):北京同德创业科技有限公司。



2 方法与结果

色谱柱:Welch Xtimate (4.6 mm×250 mm,5 μm), 检测波长:260 nm,柱温:30 ℃,流速:1.0 mL/min,进样量:10 μL,流动相:以 0.1 mol/L 磷酸盐缓冲溶液(用 3 mol/L 氢氧化钠调节 pH 值至 6.7)为流动相 A,乙腈 为流动相 B,梯度洗脱,流动相梯度洗脱程序见表 1。



分别精密称取甘露糖、氨基葡萄糖、鼠李糖、葡萄 糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖及岩藻糖标 准品 100 mg 于 10 mL 容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀, 即得 9 种单糖的标准储备溶液。再配置成浓度分别为 0.1、0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L 的不同浓度梯度单糖混合标 准溶液。分别取 100 μL 的单糖标准液及不同浓度梯度 的混合标准溶液,各加 200 μL、0.6 mol/L 的 NaOH 溶 液,置于 10 mL 的具塞试管中,漩涡混匀;再加 400 μL、 0.6 mol/L 的 PMP 甲醇溶液,漩涡混匀,充入 N2,在 70 ℃的烘箱中避光反应 110 min,取出避光冷却至室 温,加 400 μL、0.3 mol/L 的 HCl 溶液中和,加水至 2 mL, 再加等体积的氯仿,漩涡混匀,静置,弃去氯仿相,如此 萃取 3 次。将水相用 0.45 μm 微孔膜过滤后供高效液 相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC) 分析。



3 结论

最终,通过回归模型分析,以多糖水解后单糖总量得 率为评价指标,葛仙米多糖适宜的提取工艺参数为浸 提时间 110 min、浸提温度 97 ℃、料液比 1 ∶ 230(g/mL); 在此条件下,得到单糖总量得率为 29.14 %,实际值与 理论值基本相符,说明模型对葛仙米多糖提取工艺条 件参数优化可靠可行,具有一定的实用价值。



 


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