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生化培养箱在氧氟沙星无菌方法学研究的使用

返回列表 来源:未知 发布日期:2019-08-29 10:14【

注射用甲磺酸左氧氟沙星为喹诺酮类广谱抗菌 药物,其为氧氟沙星左旋体,抗菌活性约为氧氟沙星 的 2 倍,抗 菌谱 广、抗 菌作 用强 ,但对 厌氧 菌抗 菌作 用较差。2015 年版《中国药典( 四部) 》通则 1101 无菌检 查法136 - 140 规定,药品进行无菌检查前,应首先进行方 法适用性试验,以确定其适宜性,避免造成微生物漏检。 因为大部分药品对微生物有一定的抑菌性,特别是抑菌 性很强的抗菌类药品,受微生物污染后,微生物受其抑 菌性的影响不能正常繁殖,细胞受损伤但并未死亡,服用该药品后,药品在患者体内的抑菌性逐渐减弱,受损微 生物逐渐复苏并进行正常繁殖,从而对患者造成危害。 常规方法无法检出药品污染微生物情况,只能通过稀释 液或培养基稀释、薄膜过滤、加中和剂或灭活剂等方法 消除药品的抑菌性后才可充分检出污染微生物。



1 材料与方法

1.1 仪器与材料


仪器: HTY - 601 型集菌仪( 杭州泰林生物技术设备 有限公司) ; SHINVLMQC 型压力蒸汽灭菌器( 山东新华医 疗器械股份有限公司) ; WGP - 600 型恒水式电热恒温培 养箱( 重庆万达实验仪器厂) ; LRH-250型生化培养箱( 上 海一恒科学仪器有限公司) ; HFsafe - 760S 型生物安全柜 ( 上海力申科学仪器有限公司) ; PB - 10 pH 酸度计( 德国 Sartorius 公司) ; 涡旋振荡仪( 德国 IKA 公司) ; DGB220 型 薄膜过滤器( 杭州泰林生物技术设备有限公司) 。 试药: 注射用甲磺酸左氧氟沙星注射剂[陕西博森 生物制药股份集团有限公司,批号为 20170428 - 5,规 格为 0. 3 g( 以左氧氟沙星计) ]。 培养基与冲洗液: 硫乙醇酸盐流体培养基( FTM,批 号为 20180418) ,胰酪大豆胨液体培养基( TSB,批号为 20180630) ,沙 氏 葡 萄 糖 液 体 培 养 基 ( SDB,批 号 为 180916) ,沙 氏 葡 萄 糖 琼 脂 培 养 基 ( SDA,批 号 为 170316) ,0. 1% 蛋白胨水溶液( 批号为 20170602) ,均购 于北京陆桥技术有限责任公司。



1.2 方法

1. 2. 1 试验菌株制备


将金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌分 别接种于胰酪大豆胨液体培养基中,生孢梭菌接种于硫 乙醇酸盐液体培养基中,35 ℃ 条件下培养 24 h; 将白色 念珠菌接种于沙氏葡萄糖液体培养基中,25 ℃ 条件下 培养 3 d。上述培养物用无菌 0. 9% 氯化钠溶液制成适宜 浓度的菌悬液; 将黑曲霉接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基 上,25 ℃ 条件下培养 7 d,加入 5 mL 含 0. 05% ( V / V) 聚山梨酯 80 的无菌 0. 9% 氯化钠溶液,洗脱孢子,收集 孢子悬液,用相同无菌 0. 9% 氯化钠溶液制成适宜浓 度的孢子悬液。菌液稀释度及接种量见表 1。



1. 2. 2 无菌方法适用性研究


试验Ⅰ组: 开启集菌仪,取供试品 20 支,每支以 0. 1% 蛋白胨水溶液约 10 mL 溶解,取半量导入薄膜过 滤器内,用 0. 1%蛋白胨水溶液冲洗滤膜 3 次,每次 100mL, 最后 1 次冲洗过程在滤膜内留少量溶液,再分别加菌落 数小于 100 cfu 的 6 种试验菌,过滤。每个培养管内灌注100 mL 培养基,金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽 孢杆菌和生孢梭菌采用硫乙醇酸盐流体培养基,白色念 珠菌和黑曲霉采用胰酪大豆胨液体培养基。硫乙醇酸盐 流体培养基 35 ℃ 条件下培养,胰酪大豆胨液体培养基 25 ℃条件下培养,均培养 5 d。



2 结果

可见,当采用 0. 1% 蛋白胨水溶液冲洗 滤膜 300 mL 时( 试验Ⅰ组) ,6 种试验菌均未变浑浊; 冲洗量增至 600 mL 并在冲洗液中添加终体积分数为 5% 聚山梨酯 80 时( 试验Ⅳ组) ,白色念珠菌和黑曲霉变 浑浊,其余 4 种细菌始终澄清; 当采用 0. 1% 蛋白胨 水 溶液冲洗滤膜 300 mL 并在最后 1 次冲洗过程添加 2 mL 浓度为 1 mol / L 的 MgSO4 时( 试验Ⅱ组) ,金黄色 葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌和黑曲 霉均变浑浊,而大肠埃希菌始终澄清; 即使将 1 mol / L 的 MgSO4 加入量增至 4 mL 时( 试验Ⅲ组) ,或冲洗次数增至 6 次时(Ⅴ组),也未去除甲磺酸左氧氟沙星对大肠 埃希菌的抑菌性; 当采用 0. 1% 蛋白胨水溶液 600 mL 冲洗滤膜并添加 4 mL 浓度为 1 mol / L 的 MgSO4 时( 试 验Ⅵ组) ,大肠埃希菌变浑浊。因此,可取规定量供试品, 每支同步以 0. 1% 蛋白胨水溶液约 10 mL 溶解,导入集 菌过滤器内,采用薄膜过滤法,用 0. 1% 蛋白胨水溶液 600 mL 冲洗滤膜,最后 1 次冲洗过程在滤膜内留少量 溶液,加入 1 mol / L MgSO4 溶液 4 mL,作用 20 min,最后 在培养管内加入 100 mL 适宜培养基进行无菌检查,并 以大肠埃希菌为阳性对照菌。



3 讨论

无菌检查是有关药品安全性的一种定性试验。 无菌检查法是针对无菌工艺产品和最终灭菌产品的无 菌性而建立的检验法,药典要求,无菌药品包括各类注 射用制剂、眼科用制剂及用于手术、严重烧伤、严重创伤 等的产品。即进入人体血液循环系统、植入或埋入肌肉、 皮下组织、与创伤部位接触的产品、材料、器械及医学使 用上要求无菌的品种,均可按本方法进行无菌检查。 注射用甲磺酸左氧氟沙星直接进入人体血液循环,故应 对其进行无菌检查,以确保用药安全。



 


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