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一恒生化培养箱对体外分子定向

返回列表 来源:未知 发布日期:2020-08-05 09:12【

1 材料与方法


LRH - 250 型生化培养箱,上海一恒科学仪器有限公司产; DHZ - DA 型水平摇床,江苏 太仓市实验设备厂产; PHS - 3C 型 pH 计,上海 仪电科学仪器股份有限公司产; 752N 型紫外分 光光 度 计,上海仪电分析仪器有限公司 产; SMART 型显微镜,重庆奥特光学仪器有限公司 产; 5427R 型高速低温离心机,德国 Eppendorf 公司产.


2 结果与分析


在易错 PCR 反应体系中,调整 dNTP 的比例, 使 dCTP、dTTP 的浓度增大到 1 mmol/L,以促进碱 基错配的倾向性. 此外,在易错 PCR 反应体系中分 别加入浓度梯度为 0 mmol/L,0. 01 mmol/L, 0. 05 mmol /L,0. 10 mmol /L,0. 15 mmol /L, 0. 20 mmol /L 的 MnCl2,以得到不同突变频率的 文库. 用不同 Mn2 + 浓度的易错 PCR 扩增产物 构建表达载体,分别转化大肠杆菌 DH5α 感受 态细胞,从突变文库中的每个 Mn2 + 浓度中随机 挑取 10—20 个克隆子进行菌落 PCR,检测其阳 性转化率; 再从中各挑选 3 个阳性克隆子进行 测序. 在易错 PCR 突变文库的建立中,要考虑 的重要因素是突变频率的控制,一般来说,突变 基因控制在 1—5 个碱基,对应的氨基酸突变数 为 1. 0 ~ 2. 0 个比较合理






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