上海一恒

服务热线:021-58201756
13621695486

他们都在找: 一恒BPC-70F生化培养箱(液 一恒DHP-9162台式电热微生物
当前位置主页 > 新闻动态 > 行业动态 >

检测丹参中14种水溶性成分(DZF 真空干燥箱使用

返回列表 来源:未知 发布日期:2019-12-12 09:27【

丹参是唇形科植物丹参( Salvia miltiorrhiza Bre.) 的干燥根及根茎,是我国一种传统中药材,应用历 史悠久,用途广泛。据《神农本草经》记载,丹参主治 “心腹邪气”,能够“破症除瘕,止烦满,益气”,《本草 纲目》记载丹参还具有“活血,通心包络,治疝痛”等功效。


1 仪器与试药


 1.1 仪器 


Acquity H-classUPLC( 美国 Waters 公司) 包括低压四元溶剂系统、自动进样恒温样本管理器、光 电二极管矩阵检测器、ACQUITY UPLC BEH C18色谱 柱( 2.1 mm×50 mm,1.7 μm) Empower3 色谱工作站; XS-106DU 电子分析天平( 瑞士梅特勒-托利多仪器公 司,感量: 0.01 mg) ; BL15-60AA 超声波清洗机( 无锡沃信仪器制造有限公司) ; RE-52AAC 旋转蒸发仪( 上海 亚荣生化仪器厂) ; YJ-100 中药粉碎机( 济南亿健医疗 设备有限公司) ; DHG 鼓风干燥箱( 上海一恒科学仪器 有限公司) ; DZF 真空干燥箱( 上海一恒科学仪器有限 公司) ; 调温电热器( 南通利豪实验仪器有限公司) 。 


1.2 试药与试剂


 乙腈( 色谱纯,美国 Honeywell Burdick ﹠ Jackson 公司,批号: S15A1H) ; 乙酸( 色谱纯,美国 TEDIA 公司,批号: 17040594) ; 纯化水( 杭州娃哈哈集团有 限公司,批号: 20180324) 。标准物质或对照品: 丹参素钠 ( 批号: 110855-201412,含量: 98.1%) 、原儿茶酸( 批号: 110809-201205,含量: 99.9%) 、丹酚酸 B ( 批号: 111562- 201716,含量: 94.1%) 、迷迭香酸( 批号: 111871-201404,含 量: 90.5%) 购自中国食品药品检定研究院; 原儿茶醛 [GBW09553,含量: ( 99.8±0.4) %) ]、咖啡酸[GBW09529, 含量: ( 99.5±0.7) %]、阿魏酸[GBW09518,含量: ( 99.8±0.5) %]、异阿魏酸[GBW09574,含量: ( 99.7±0.4) %]、 丹酚酸 A[含量: ( 99.1±0.4) %]购自中国医学科学院 药物 研 究 所; 9丹 酚 酸 B 单 甲 酯 ( 批 号: MUST - 17060205,含量: 99.16%) 、9’丹酚酸 B 单甲酯( 批号: MUST-171114055,含量: 99. 38%) 、丹酚酸 C ( 批号: MUST- 17031402,含 量: 99. 90%) 、紫 草 酸 ( 批 号: MUST-17053003,含量: 99.58%) 、丹酚酸 B 二甲酯( 批 号: MUST-17041614,含量: 90.04%) 购自成都曼斯特生 物科技有限公司。 不同批次的丹参样品分别购买自山东省莱芜市艾 山、九龙、罗汉峪、密埠等地。经中国医学科学院药物 研究所马辰研究员鉴定为唇形 科 植 物 丹 参 Salvia miltiorrhizaBre.的干燥根及根茎。 


2 方法与结果 


2.1 色谱条件


 色谱柱: Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱( 2.1 mm×50 mm,1.7 μm) ; 柱温 30 ℃ ; 进样 量: 1 μL; 检测波长 286 nm; 流动相: 0. 5% 乙酸溶液 ( A) -乙腈( B) ,流速: 0. 6 mL·min-1 ,梯度洗脱: 0 ~ 1.02 min,90%→80% A; >1.02 ~ 4.08 min,80%→72% A; >4.08 ~ 4.76 min,72%→55% A; > 4.76 ~ 5.50 min, 55%→90%A; >5.50~8 min,90%A。 


2.2 溶液的制备 


2.2.1 对照品溶液的制备 


分别称取丹参素、原儿茶酸、 原儿茶醛、咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸、迷迭香酸、紫草酸、 丹酚酸 B、丹酚酸 A、丹酚酸 C、9丹酚酸 B 单甲酯、9'丹酚 酸 B 单甲酯、丹酚酸 B 二甲酯约 10 mg,精密称定,加入 80%甲醇溶液溶解并定容至 10 mL,得到浓度依次为 1.126,0.944,1.06,1.011,1.010,1.020,0.962,0.973,0.982, 0.968,0.996,1.049,1.067,0.904 mg·mL-1 的各对照品溶液 作为储备液,其中原儿茶酸、丹酚酸 C、9丹酚酸 B 单甲 酯、9'丹酚酸 B 单甲酯、丹酚酸 B 二甲酯稀释10 倍后作为 对照品溶液,其余 10 种成分将储备液作为对照品溶液。 精密量取上述储备液各 1 mL 至25 mL量瓶中,以 80%甲 醇溶液定容,摇匀,即得混合对照品溶液。


2.2.2 供试品溶液的制备


称取样品粉末[过三号筛 ( 50 目,孔径 355 μm±13 μm) ]约 1 g,精密称定,置于 250 mL 锥形瓶中,准确加纯化水 100 mL,加热回流 4 h,冷却过滤后将续滤液减压浓缩,放冷,并定容至 25 mL,摇匀,即得。 


2.3 方法学验证 


2.3.1 专属性实验


 取“2.2”项下对照品溶液与供试品 溶液,按照“2.1”项下色谱条件进样,记录色谱图,见图 1。


 2.3.2 线性关系考察 


分别取“2.2.1”项下各储备液 0.5,1.0,1.5,2.0,2.5 mL 至 50 mL 量瓶中,定容,摇匀,得到 5 份梯度浓度的混合对照品溶液,按“2.1”中色谱 条件进行分析,以各成分浓度为横坐标,峰面积为纵坐 标绘制标准曲线,得到 14 种水溶性成分的线性方程及 范围,见表 1。


2.3.3 精密度实验


 取“2.2.1”项下对照品溶液,按照 “2.1”项下色谱条件连续进样 6 次,测得峰面积,14 种 成分 RSD 值处于 0.19% ~ 1.81%,小于 2%,表明仪器 精密度良好。


 2.3.4 稳定性实验


取上述“2.2.2”项下供试品溶液, 分别于 0,2,4,8,12,24 h 进样测定峰面积,14 种成分 在各时间点的峰面积的 RSD 值处于 0.57% ~ 0.51%, 小于 2%,证明供试品溶液稳定性良好。 


2.3. 5 重复性实验


取样品 2 ( 罗汉峪直径 0. 1 ~ 0.5 cm的丹参药材样品) ,按照“2.2.2”项方法制备 6 份供试品溶液,按照“2.1”项下色谱条件进样检测,记 录各成分峰面积,14 种成分平均含量 RSD 值处于 0.04% ~1.24%,小于 2%,表明方法重复性良好。


3 讨论


测定丹参中水溶性成分的色谱条件中,流动相的有机相多为乙 腈或者甲醇,非有机相多为乙酸溶液或磷酸溶液,柱温 集中在 20~40 ℃,波长范围在 200 ~ 290 nm,为探求最 合适的色谱条件,笔者对流动相( 甲醇-0.5%乙酸溶液、 乙腈-0. 5% 乙酸溶液、乙腈-0. 1% 磷酸溶液) 、波长 ( 210,254,286 nm) 、柱温( 20,30,35 ℃ ) 进行考察,当 流动相为甲醇-0.5%乙酸溶液时,所测成分间的分离度 较低,当流动相为乙腈-0.1% 磷酸溶液时,酸性较大的 成分( 如丹酚酸 A) 易产生拖尾,而流动相为乙腈-0.5% 乙酸溶液时,峰形与分离度均较为理想; 当波长为 210 nm时,溶剂效应显著,当待测成分含量较低时易被 溶剂峰掩盖,而波长为 254 nm 时,大部分成分的紫外 吸收值变小,有些成分响应值甚至减小到 286 nm 下的 一半,所以选定波长为 286 nm; 当柱温为 20 ℃时,色谱 峰出现前延,当柱温为 35 ℃时,出峰时间太短,分离度 欠佳,故最终选择的柱温为 30 ℃ ; 结合上述考察结果 最终确定当流动相为乙腈-0.5%乙酸溶液,检测波长为 286 nm,柱温 30 ℃时各成分的分离效果及峰形最好。




免责声明:文章仅供学习和交流,如涉及作品版权问题需要我方删除,请联系我们,我们会在第一时间进行处理。