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一恒分析皮肤主要构成细胞中的表达

导读:探讨核激素受体在皮肤主要构成细胞中的表达情况。


返回列表 来源:未知 发布日期:2019-09-17 13:46【

皮肤是人 体 最 大 的 器 官,是人体最外层的屏障, 皮肤屏障功能 完 好 对 维 持 机 体 的 健 康 具 有 十 分 重 要 的作用。既往研究发现,核激素受体可调节细胞的增 殖、分化和凋亡,在 皮 肤 的 发 育 过 程 中 发 挥 着 重 要 的 作用。目前在皮肤科临床治疗中运用最多、研究最 深入的核激素受体是糖皮质激素受体、维甲酸受体和 维生素 D受体及其相关配体。随着 新 的 核 激 素 受 体 不断涌现,核激素受体家族成员与皮肤之间的相互作 用值得进一步探讨。

1 材料与方法

1.1 材料

人皮 肤 KC 和人 真 皮 FB 均购 自 美 国 组 织培养库(ATCC)。

1.2 仪器与试剂

高级光学显微镜(日 本 Olympus 公司),PCR反应扩增仪(美国 Bio-Rad公司),荧光定 量PCR系统(美国 AppliedBiosystems公司),微量紫 外分光 光 度 计(美 国 Thermo公司)。细胞 培 养:KC 培养基,FB 培养 基,胰 蛋 白 酶 终 止 缓 冲 液(ATCC), DPBS缓冲液(美国 Hyclone公司),青霉素-链霉素溶 液(美国Cellgro公司),胰蛋白酶(美国 Roche公司)。PCRarray:RNeasyMini试剂盒、RT2FirstStrand试 剂盒、RT2 SYBR GreenPCR Mastermix、RT2 Profi- lerPCRarrayplate(美国 Qiagen公司)。

1.3 方法

1.3.1 细胞培养

37 ℃、含5% CO2 的细胞培养箱(一恒MJ-150-I霉菌培养箱
)中,用各自专用培养基对细胞进行培养。


1.3.2 细胞 RNA 的提取

分别提取培养好的 KC、 FB的 RNA。分别 检 测 两 种 RNA 标 本 的 纯 度 和 浓 度,每种细胞3个 复 孔。RNA 提取过程中所使用的 容器和 移 液 吸 头 均 为 RNase-free配 置 并 严 格 按 照 RNeasyMiniKit说明书要求进行操作。

1.3.3 PCRarray检测

按 RT2 ProfilerPCRarray plate试剂盒的操作说明,配置对应的反应体系。扩增 条件为:95 ℃预变性10min,95℃15s,60℃1min, 共45个循环。

1.4 统计学处理

采用2-ΔΔCt法对实验所得的计量 资料进行分析。采用 MicrosoftExcel软件 对 不 同 组 别的数据进行归类整理后进行统计学分析。

2 结 果

在 KC和 FB中,核激素受体有大量的表达。大部分核激素受体在人 KC中的表达水平比在FB 中高。除经典的 糖 皮 质 激 素 受 体(GR)以外,表 达 较 高的 核 激 素 受 体 主 要 集 中 在 RXR 二 聚 体 家 族,如 VDR、RXRs、PPARs、LXRβ 和 TRs等,且部 分受体 如 VDR、RXRs、PPARs的表 达 明 显 高 于 GR 的表达。此外,还有一些孤儿受体如 NR2F2、NR1D2、 NR2C1、NR2C2 等的表达也很高。研究 也 发 现,在皮肤主要构成细胞中,存 在 RXRα、 RXRβ、RARα 和 RARγ 表达,但以 RXRα 和 RARγ 表 达为主,是皮肤中的优势表达亚型。RAR 和 RXR 各 亚型之间具有各自特异性的配体,且和各配体的亲和 力不同。其作用的大小取决于受体的分布量,辅助因 子的性质和数 量 及 维 甲 酸 受 体 选 择 性 激 动 剂 和 拮 抗 剂的相互作用。部分患者使用维甲酸类药物时,皮 肤会出现红斑、脱 屑、干 燥、烧 灼 等 典 型 的 不 良 反 应, 这些皮 肤 刺 激 反 应 与 维 甲 酸 受 体 RARα、RARβ、 RARγ 的高表达和被激活密切相关。表皮是脂质代谢活跃的部位,本研究发现在皮肤 主要构成细胞中,核激素受体 PPARα、PPARδ 两种亚 型均有表达,其中 PPARδ 的表达水平最高,是优势表 达亚型。既 往 研 究 发 现,激 活 PPARs可诱 导 KC 分 化。受体激活可诱导表皮脂质合成,促进板层小体的 形成和分泌,增加角质层内脂质处理必需酶的活性, 诱导板层膜的形成,从而改善皮肤屏障功能。

3 讨 论   

在调节皮肤细胞功能和动态平衡的过程中,核激 素受体发挥着十分重要的作用,其中糖皮质激素与细 胞中的 GR 结 合 以 后,在炎症性皮肤病中发挥着抗 炎、免疫抑制、抗细胞增殖等生物学作用。但由于 GR 靶向治疗的配体特异性较弱,长期系统使用会导致高 血压、骨质疏松 等 不 良 反 应;长 期 局 部 使 用 可 导 致 皮 肤萎缩、类 固 醇 性 痤 疮、毛细血管扩张等不良反应。 因此,在一定程度上限制了糖皮质激素的应用。目 前,寻找不良反应更小的靶向治疗配体或其他核激素 受体的靶向药物已经成为研究的热点。




 


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